骨碱性磷酸酶检查什么
骨碱性磷酸酶,这是一个非常冗长的词语,现象学习生物的同学们应该比较熟悉了 。一说起骨碱性磷酸酶 , 我们会联想到它的检查方法 。那么,骨碱性磷酸酶怎么检查呢?接下来,小编就为大家详细介绍一下这方面的内容,希望对大家有所帮助哦 。
在反应装置的加样孔中,均匀滴加两滴洗涤液 。待其渗入,目的在于加随后的全血样品滴加后渗滤顺利 , 血球和血浆分离较快,其渗入一般较快,如渗入缓慢,可用手轻压一下血浆分离器 , 即可迅速渗入 。如漏加洗涤液 , 则有可能使样品血浆分离缓慢且不均匀,将影响下一步亲和反应及显色反应,最后人为地使显色斑点均一性差 。
试剂盒要求使用新鲜全血,不能使用抗凝血 。因某些抗凝剂会抑制BAP的活性 。采血时试剂盒是配套的30μl定量采血管,手持有黄线的一端,用另一端吸取血液标本恰好至黑色刻度线,然后用吸球迅速将其均匀加入加样孔中,注意勿产生气泡 。如用血清分析,则需加17/J 1 。加样后,血液一般在30秒内可全部渗入 。如渗透较慢 , 可用手轻压一下分离器 。
待血液全部渗入后,再逐滴加入两滴洗涤液 。由于此时膜表面已截留了血球 。所以此时洗涤液渗滤较慢,一般约需1—2分钟 。如个别又出现渗入较慢的,也可用手轻压分离器,即可加快渗入速度 。
待洗涤液渗入后,此时样品中血浆已完全转运到亲和膜上,将血浆分离器从反应装置上取下,即可见反应滑板上的圆形反应膜 。注意膜上不能附着有其它膜片,如有可能为分离器上的过渡膜松动脱落而成,此时应用镊子或分离器一角将其挑去 。
为了除去血浆中其它物质的干扰,在反应膜上只保留BAP结合蛋白复合物,在反应膜上再滴加两滴洗涤液(小儿型)或中止液(成人型),此时液体渗入较快 。
推动反应滑板 , 使反应膜定位在反应孔的正中 , 此步骤使亲和反应和酶促显色反应在两个不同的区域进行,以避免亲和反应对显色反应的干扰,提高检测灵敏度和特异性 。
在反应孔正中滴加一滴显色液,置37℃恒温水浴箱中按说明书上标明的反应时间进行保温反应 。滴加显色剂时 , 应先将显色剂平衡至室温 。注意:反应温度指的是水浴箱内的气温,而非水的温度;且反应装置应放在试管架或别的支架上,切勿将反应装置放在水中进行反应 , 放时也要注意避免反应膜上溅上水滴 。显色液正常的颜色为淡黄色,在2-8℃避光条件下可稳定一年,如变蓝或变成无色,可能是运输过程中外界因素的影响所致,对检测结果有一定影响,请勿使用并及时与供应商或公司技术服务部门联系 。
显色结束后 , 将反应滑板推回原位,此时反应膜上剩余的显色液将会被吸收掉 , 之后滴加一滴中止液,停止酶促显色反应 。因为显色反应时间已经出厂前校正确定,故实际显色时间与说明书上标明的显色时间应尽可能接近 。
试剂盒使用的显色系统是BCIP/INT,显色产物是一种蓝紫色色淀 。正常小儿血浆BAP活性一般≤200U/L,~E常成人血浆BAP活性一般≤150U/L,钙营养不良者血浆中BAP活性升高,随钙缺乏程度不同 , 反应膜上显色强度不同 。报告时,对照标准色板报告:
小儿:≤200U/L,250U/L,300U/L 。如显色偏离标准色板标明的数值,则可据目测实际报告为200-250U/L,250-300U/L或300U/L;
成人:≤150U/L , 200U/L≤200U/L 。如显色偏离标准色板标明的数值,则可据目测 , 实际报告为150-200U/L,200-250U/L或250U/L 。
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